Protective Autophagy in 5-Fluorouracil-Resistant Colorectal Cancer Cells and ERK-RSK-ABCG2 Linkage / Autofagia Protectora en Células de Cáncer Colorrectal Resistentes al 5-Fluorouracilo y Enlace ERK-RSK-ABCG2

SUMMARY: To evaluate the anti-cancer effects of yeast extract on resistant cells, autophagy and necroptosis were investigated in 5-fluorouracil (5-FU)-resistant colorectal cancer cells. Further underlying characteristics on drug resistance were evaluated, focused on ERK-RSK-ABCG2 linkage. SNU-C5 and 5-FU resistant SNU-C5 (SNU-C5/5-FUR) colorectal cancer cells were adopted for cell viability assay and Western blotting to examine the anti-cancer effects of yeast extract. Yeast extract induced autophagy in SNU-C5 cells with increased Atg7, Atg12-5 complex, Atg16L1, and LC3 activation (LC3-II/LC3-I), but little effects in SNU-C5/5-FUR cells with increased Atg12-5 complex and Atg16L1. Both colorectal cancer cells did not show necroptosis after yeast extract treatment. Based on increased ABCG2 and RSK expression after yeast extract treatment, drug resistance mechanisms were further evaluated. As compared to wild type, SNU-C5/5-FUR cells showed more ABCG2 expression, less RSK expression, and less phosphorylation of ERK. ABCG2 inhibitor, Ko143, treatment induces following changes: 1) more sensitivity at 500 mM 5-FU, 2) augmented proliferation, and 3) less phosphorylation of ERK. These results suggest that protective autophagy in SNU-C5/5-FUR cells with increased ABCG2 expression might be candidate mechanisms for drug resistance. As the ERK responses were different from each stimulus, the feasible mechanisms among ERK-RSK-ABCG2 should be further investigated in 5-FU-resistant CRC cells.

Para evaluar los efectos anticancerígenos del extracto de levadura en células resistentes, se investigaron la autofagia y la necroptosis en células de cáncer colorrectal resistentes al 5-fluorouracilo (5-FU). Además se evaluaron otras características subyacentes de la resistencia a los medicamentos centrándose en el enlace ERK-RSK-ABCG2. Se usaron células de cáncer colorrectal SNU-C5 (SNU-C5/5-FUR) resistentes a SNU-C5 y 5- FU para el ensayo de viabilidad celular y la transferencia Western para examinar los efectos anticancerígenos del extracto de levadura. El extracto de levadura indujo autofagia en células SNU-C5 con mayor activación de Atg7, complejo Atg12-5, Atg16L1 y LC3 (LC3-II/LC3-I), pero pocos efectos en células SNU-C5/5-FUR con aumento de Atg12-5 complejo y Atg16L1. Ambas células de cáncer colorrectal no mostraron necroptosis después del tratamiento con extracto de levadura. Se evaluaron los mecanismos de resistencia a los medicamentos. en base al aumento de la expresión de ABCG2 y RSK después del tratamiento con extracto de levadura.En comparación con las de tipo salvaje, las células SNU-C5/5-FUR mostraron más expresión de ABCG2, menos expresión de RSK y menos fosforilación de ERK. El tratamiento con inhibidor de ABCG2, Ko143, induce los siguientes cambios: 1) más sensibilidad a 5-FU 500 mM, 2) proliferación aumentada y 3) menos fosforilación de ERK. Estos resultados sugieren que la autofagia protectora en células SNU-C5/5-FUR con mayor expresión de ABCG2 podría ser un mecanismo candidato para la resistencia a los medicamentos. Como las respuestas de ERK fueron diferentes de cada estímulo, los mecanismos factibles entre ERK-RSK- ABCG2 deberían investigarse más a fondo en células CCR resistentes a 5-FU.

Is drug-resistant Mycobacterium leprae a real cause for concern?: First approach to molecular monitoring of multibacillary Colombian patients with and without previous leprosy treatment / ¿Es la resistencia de Mycobacterium leprae a los medicamentos un verdadero motivo de preocupación?: Primera aproximación a la vigilancia molecular de pacientes colombianos multibacilares con tratamiento previo para lepra y sin él

Introduction: There is no information in Colombia on Mycobacterium leprae primary and secondary drug resistance in regards to the WHO-multidrug therapy regime. On the other hand, public health authorities around the world have issued various recommendations, one of which prompts for the immediate organization of resistance surveillance through simple molecular methods. Objective: To determine the prevalence of Mycobacterium leprae drug resistance to rifampicin, ofloxacin and dapsone in untreated and previously treated patients at the Centro Dermatológico Federico Lleras Acosta during the 1985-2004 period. Materials and methods: We conducted a retrospective study which included multibacillary patient biopsies through elective sampling: 381 of them from new patients and 560 from previously treated patients. Using a microtome, we obtained six slides from each skin biopsy preserved in paraffin, and we extracted M. leprae DNA. We amplified three molecular targets through PCR and obtained the patterns of drug resistance to dapsone, rifampicin and ofloxacin by reverse hybridization. Finally, we collected epidemiological, clinical and demographical data for analyses. Results: From 941 samples under study, 4.14% of them were resistant to one or more drugs, and 5.77 and 3.04% had resistant genotypes in new and previously treated patients, respectively. Total resistance for each drug was 0.43% for dapsone, 3.19% for rifampicin and 1.17% for ofloxacin. We found statistically significant differences for rifampicin and for the total population when comparing the results from untreated versus previously treated patients. Two thirds of the resistant samples were resistant to rifampicin alone or combined. Conclusions: The standard multidrug therapy schemes continue being effective for leprosy cases; however, it is necessary to guarantee adherence and regularity. Surveillance to drug resistance in new and previously treated leprosy cases should be established.

Introducción. Colombia no dispone de información sobre farmacorresistencia primaria y secundaria de Mycobacterium leprae al esquema de terapia múltiple de la Organización Mundial de la Salud (OMS) y las autoridades de salud pública del mundo han emitido varias recomendaciones, entre las cuales está organizar de inmediato la vigilancia a la resistencia empleando métodos moleculares simples. Objetivo. Determinar la prevalencia de la resistencia de M. leprae a rifampicina, ofloxacina y dapsona en pacientes del Centro Dermatológico Federico Lleras Acosta con tratamiento previo y sin él durante el período de 1985 a 2004. Materiales y métodos. Se realizó un estudio retrospectivo. Mediante muestreo electivo se incluyeron biopsias de pacientes multibacilares: 381 de pacientes nuevos y 560 de pacientes previamente tratados. Se obtuvieron con micrótomo seis cortes de cada biopsia de piel incluida en parafina, y se realizó la extracción de ADN de M. leprae. Se llevó a cabo la amplificación de tres blancos moleculares mediante PCR y se obtuvieron los patrones de resistencia a los medicamentos dapsona, rifampicina y ofloxacina por hibridación inversa. Se recolectaron datos epidemiológicos, clínicos y demográficos para llevar a cabo los análisis. Resultados. De las 941 muestras estudiadas, 4,14 % era resistente a uno o más fármacos, y se detectaron 5,77 y 3,04 % con genotipos resistentes en pacientes nuevos y previamente tratados, respectivamente. La resistencia total para cada fármaco fue de 0,43 % a dapsona, 3,19 % a rifampicina y 1,17 % a ofloxacina. Se encontró una diferencia estadísticamente significativa para rifampicina y para la población total al comparar los resultados de los pacientes no tratados con los de los pacientes tratados previamente. Dos tercios de las muestras resistentes lo fueron a rifampicina sola o combinada. Conclusiones. Los esquemas de terapia múltiple estándar siguen siendo efectivos para los casos de lepra; sin embargo, es necesario garantizar el cumplimiento y la regularidad y establecer la vigilancia de la farmacorresistencia en pacientes nuevos y previamente tratados.

Antibacterial resistance and trend of urinary tract pathogens to commonly used antibiotics in Kashmir Valley / Resistencia antibacteriana y tendencia de los patógenos de las vías urinarias frente a los antibióticos comúnmente usados en el Valle de Cachemira

OBJECTIVE: Increase in resistance pattern of urinary tract pathogens to conventional antimicrobial agents used for urinary tract infections (UTIs) is gaining the attention of many microbiologists worldwide in respect to treatment of UTIs. The aim of the present study was to obtain data on resistance patterns of pathogens responsible for UTIs to currently used antimicrobial agents in Sher-I-Kashmir Institute of Medical Sciences (tertiary healthcare hospital). METHOD: A total of 2842 samples were collected from both outpatient and inpatient departments. The majority of samples in this study were midstream urine specimens, others included catheterized urine samples. Standard parameters were followed for isolation and identification of clinical isolates and further antimicrobial susceptibility test was done by Kirby Bauer disk diffusion method. RESULTS: Out of 2842 samples, 1980 (67%) were culture positive. Escherichia coli (E coli) was the most prevalent isolate (OP 63%, IP 45.5%) followed by Klebsiella pneumonia (K pneumonia) as the second commonest UTI-causing agent (OP 15.9%, IP 21.7%). High percentage of isolates showed resistance to sulfa drugs such as cotrimoxazole. First generation cephalosporins were ineffective, while aminoglycosides and third generation cephalosporins were effective against E coli, K pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa (P aeruginosa), Enterococcus faecalis and Staphyococcus aureus (Staph aureus). Furthermore, this study noticed that glycopeptide drugs such as vancomycin are highly effective against E faecalis and Staph aureus UTIs. CONCLUSION: This study reveals the increased trend in resistance pattern of uropathogens in the valley region. These data may aid health professionals in choosing the appropriate treatment for patients with UTI in the region and hopefully will prevent the misuse of antibiotics.

OBJETIVO: El aumento del patrón de resistencia de los patógenos de las vías urinarias frente a los agentes antimicrobianos convencionales usados para las infecciones de las vías urinarias (IVU) está ganando la atención de muchos microbiólogos a nivel mundial, en relación con el tratamiento de las IVU. El objetivo del presente estudio fue obtener datos sobre los patrones de resistencia de los patógenos responsables de las IVU en el Instituto de Ciencias Médicas Sher-I-Cachemira (hospital de atención terciaria a la salud) frente a los agentes antimicrobianos de uso común. MÉTODO: Se recogieron un total de 2842 muestras provenientes de los departamentos de pacientes externos e internos. La mayoría de las muestras en este estudio fueron especimenes de orina de mitad de micción; otros incluyeron muestras de orina cateterizada. Se siguieron los parámetros estándar para el aislamiento y la identificación de los aislados clínicos, y posteriormente se realizó la prueba de susceptibilidad antimicrobiana mediante el método Kirby-Bauer de difusión por disco. RESULTADOS: De 2842 muestras, 1980 (67%) fueron cultivos positivos. Escherichia coli (E coli) fue el aislado más frecuente (OP 63%, IP 45.5%) seguido por Klebsiella pneumonia (K pneumonia) como el segundo agente más común causante de IVU (OP 15.9%, IP 21.7%). Un alto porcentaje de aislados mostró resistencia a los medicamentos de sulfa, por ejemplo el cotrimoxazole. Las cefalosporinas de primera fueron ineficaces, mientras que los aminoglucósidos y las cefalosporinas de tercera generación fueron efectivas frente a E coli, K pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa (P aeruginosa), Enterococcus faecalis y Staphyococcus aureus (Staph aureus). Además, en este estudio se observó que los medicamentos glicopéptidos, tales como la vancomicina, son altamente efectivos frente a las IVU por E faecalis y Staph aureus. CONCLUSIÓN: Este estudio revela un aumento en la tendencia del patrón de resistencia de los uropatógenos en la región del Valle. Estos datos pueden ayudar a los profesionales de la salud a escoger el tratamiento apropiado para los pacientes con IVU en la región, y es de esperar que asimismo ayuden a prevenir el uso inadecuado de antibióticos.